試劑盒中取出標準品,準備7個試管,先從400ng/mL標準品(200μL)按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至20ng/mL(例:50μL的標準品母液+950μL的1×稀釋液,制備得到1000μL的20ng/mL濃度標準品),隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液,在這6個單獨的試管中將20ng/mL標準品依次2倍倍比稀釋至6個梯度,共配制7個濃度的標準品,依次為: 20ng/mL、 10ng/mL、 5ng/mL、 2.5ng/mL、 1.25ng/mL、 0.625ng/mL、 0.313ng/mL,從最高濃度標準品溶液中吸取500μL標準品到下一個試管中,輕輕吹打混勻,以此類推進行標準品的倍比稀釋(如圖所示),1×稀釋液用作零濃度標準品(0ng/mL)。

使用前10分鐘,將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液,根據(jù)所需用量配置。
以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實驗者需根據(jù)自己的實驗數(shù)據(jù)建立標準曲線。
標準品濃度(ng/mL) |
20 |
10 |
5 |
2.5 |
1.25 |
0.625 |
0.313 |
0 |
OD值 |
2.423 |
1.732 |
1.084 |
0.791 |
0.394 |
0.225 |
0.13 |
0.073 |
校正OD值 |
2.350 |
1.659 |
1.011 |
0.718 |
0.321 |
0.152 |
0.057 |
0 |
